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啤酒酵母浸出物中嗜热菌的检查方法

时间:2010-10-29 15:09:49

培养基(DTA)

蛋白胨  10g   葡萄糖   5g   2%溴甲酚紫乙醇溶液2mL  2%的琼脂

蒸馏水1000mL   pH6.7±0.1  

啤酒酵母膏中嗜热菌体的筛选

1.将各成分混悬于蒸馏水中,静止5min ,混合均匀,加热,并不断搅拌1min,分装于三角瓶中121℃ 高压灭菌 40min

2.在超净工作台中无菌称量适量样品,加入到预先灭好菌的蒸馏水中(保持水的温度为40-45°C)稀释,并且迅速振摇容器,使之混匀。

3.立即用吸量管吸取悬浮液,加入到盛有无菌DTA(溶液温度为50-60°C)的三角瓶中。

4.迅速振摇三角瓶,重新混匀。haicent.com混匀后立即将三角瓶放入到预先加热好高压灭菌锅中,加热到5磅压力(温度为108.4°C),保持10min ,然后将高压锅迅速排气。立即将三角瓶从高压灭菌锅中取出,冷却。

5.轻轻地摇动锥形瓶,将瓶中的培养基均匀分配到灭菌平皿中,琼脂凝固。

6.将平板倒置,在55±2℃ 的培养箱中72小时培养。挑取不同菌体形态的单克隆到斜面备用。

单菌落的平板培养

取斜面菌体,生理盐水适当稀释,采用倾注法,倒平板,72h、55°C倒置培养。

分离嗜热菌的液体培养

按约0.3×105个/ml的量接种液体培养基(不加琼脂的DTA培养基),55℃振荡培养。不定时取样,血球计数板计数。

高温培养注意事项:

1. 配制培养基时应先调完pH后,方可加入指示剂。

2. 由于采用高温培养,平板易脱水,因此可以在培养箱中放置一杯水,另外用塑料袋套上平皿,可有效防止平板脱水,裂块。

3. 当需要考察高温培养时(70℃以上时),可将琼脂浓度调高到2.5%,防止倒置培养时,由于高温引起琼脂脱落。


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